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产品类别

Poly FLAG多肽 

产品号 规格 单价 数量  
B23111 4 mg RMB 894.04
B23112 25 mg RMB 3594.66
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实验数据

价格对比

产品描述

Poly FLAG多肽由23个氨基酸组成,分子量为2864 Da。多肽中Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp这一基序重复三次。在碳端的8个氨基酸组成了经典的Flag标签 (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)。

产品性质

性状(颜色) 白色
形式 冻干粉
HPLC-MS纯化 95.33 % (最新批次) Poly FLAG Peptide lyophilized powder
浓度 从Anti-Flag亲和凝胶上进行FLAG融合蛋白的洗脱时,推荐的工作浓度是200-400 μg/mL。
运输条件 蓝冰
储存温度 2-8°C

应用

主要用于结合到溶液中Anti-Flag单克隆抗体上的或者结合到Anti-Flag亲和凝胶上的FLAG融合蛋白竞争性的洗脱下来。

注意事项

1 使用前认真阅读使用说明;
2 在使用及储存亲和凝胶时避免冻融,干燥或者高速离心;
3 该产品仅用于科学研究,不能用于药物及其他用途。

操作流程

适用于从Anti-Flag亲和凝胶上进行FLAG融合蛋白的洗脱。

1. 将Flag亲和凝胶彻底重悬,并迅速转移10 μL(大约包含了5 μL的凝胶珠)的凝胶重悬液到新的EP管中;
2. 加入0.6 mL的TBS缓冲液,使用移液枪混匀。5000 rpm离心30s,去除上清。重复3-4次,确保去除所有的洗涤液;
3. 加入500 μL的细胞裂解液到洗涤过的凝胶中;
4. 在要4°C摇床上孵育2h进行结合;
5. 5000 rpm离心30s,上清液转移到新的离心管中保存以后检测。
6. 上步中得到的沉淀用 0.5 ml TBS缓冲液洗3-4次,至上清液中 OD280 小于 0.05 为止。
7. 通过竞争性Poly FLAG多肽将FLAG融合蛋白进行洗脱。
将含有200-400 μg/mL Poly Flag多肽的TBS缓冲液加入上步得到的凝胶中,Poly FLag多肽缓冲液体积为凝胶体积的5倍,4°C摇床孵育2 h(为了提高洗脱效率,可延长孵育时间或重复洗脱)。
8. Anti-Flag亲和凝胶回收。
Poly FLAG多肽可能难以将所有的FLAG融合蛋白全部洗脱下来,建议通过使用5 mL的0.1 M glycine HCl(pH 3.5)缓冲液洗涤三次,将Anti-Flag亲和凝胶进行回收。回收后的Anti-Flag亲和凝胶立即使用TBS缓冲液进行平衡直到流出液pH值呈中性。
注意:不要让Anti-Flag亲和凝胶留在glycine HCl缓冲液中超过20min。
9. 保存Anti-Flag亲和凝胶。
使用5 mL缓冲液1(50% glycerol,10mM sodium phosphate,150 mM sodium chloride,0.02% (w/v) 叠氮化钠,pH 7.4)洗涤Anti-Flag亲和凝胶三次,然后加入5 mL缓冲液2 (50% glycerol,10 mM sodium phosphate,150 mM sodium chloride,0.02% (w/v) 叠氮化钠,pH 7.4)并储存于-20°C避免干掉。

储存条件

储存该产品在2-8°C。

资料下载

Poly FLAG Peptide lyophilized powder

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