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首页 > 动物实验 > 小鼠CD8+ T细胞分选试剂盒

小鼠CD8+ T细胞分选试剂盒 

小鼠CD8+ T 细胞分选试剂盒通过磁珠进行阴性分选,从小鼠脾脏细胞或其他组织的单细胞悬液中分离出 CD8+ T 细胞。
产品号 规格 单价 数量  
B90011 For 109 cell RMB 3290.00
今日订购,明日送达,全国免运费!
电话: 400-115-0509邮箱: order@bimake.cn

产品优势

简单、快速:15分钟内即可分选完成
无需分离柱:磁性分离器即可实现分离
纯度高:细胞纯度95%以上
活性高:细胞功能良好,无抗体和磁珠标记
质控严格:粒径控制,表面修饰控制

价格对比

小鼠CD8+ T细胞分选试剂盒 | 价格对比

产品描述

小鼠CD8+ T 细胞分选试剂盒可通过阴性分选从小鼠脾脏细胞或其他组织的单细胞悬液中分离出CD8+ T 细胞。原理是选用不同的生物素(biotin)标记单克隆抗体对非目标细胞(非CD8+ T 细胞)进行标记,而后通过链霉亲和素(streptavidin)标记的磁珠对非目标细胞进行清除,从而达到小鼠CD8+ T 细胞分选的目的。分选过程需要用到磁力架。

应用范围

分选小鼠脾脏CD8+ T 细胞
分选小鼠淋巴结CD8+ T 细胞

结果分析:

从 C57BL/6 小鼠脾脏细胞中分选 CD8+ T 细胞,分选前后的细胞用 FITC anti-mouse CD8 抗体(克隆号53-6.7)标记后进行流式细胞仪分析,分选前后的 CD8+ T 细胞纯度分别为 13.8%和 97.1%。

产品组成

组分 装量(For 109 cell)
Biotin-Antibody Mix 200 μl
Streptavidin 2 ml

储存条件

2-8°C下稳定保存,有效期2年,不可冷冻。

操作步骤

以分选小鼠脾脏CD8+ T 细胞为例

1. 制备单细胞悬液:在70 μm细胞筛网上研磨脾脏,以预冷的PBS冲洗细胞筛网,收集细胞悬液于50 ml离心管中,500 g,离心5 min。
2. 离心完成后,弃上清,加入5 ml ACK红细胞裂解液,室温裂解5 min,再加入20 ml PBS,500 g,离心5 min。
注意:红细胞裂解步骤可根据所用裂解液不同调整用量及时间。少量红细胞残留不会影响后续分选及细胞纯度。
3. 离心完成后,弃上清,将脾细胞重悬于PBS,细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤后,计数。计数完成后,继续以500 g,离心5 min。
4. 离心完成后,弃上清,将细胞重悬于分选buffer中,调整细胞密度为1×108 cells/ml。
注意:分选buffer为含有2 mM EDTA和2%胎牛血清(FBS)的 PBS 或者含有 2mM EDTA 和 0.5% BSA 的 PBS,需预先通过 0.22 μm 滤膜过滤除菌。
5. 将 100 μl细胞悬液(1×107 个细胞)加入无菌流式管底部,再加入2 μl Biotin-Ab Mix,混匀后4℃孵育10 min。
注意:加入细胞悬液时将细胞加入流式管底部,避免沿流式管管壁加入。根据所使用磁力架特点也可使用离心管进行细胞分选。如果分选更多细胞,则按比例增加Biotin-Ab Mix用量。
6. 孵育完成后,在流式管中加入20 μl Streptavidin beads(使用前涡旋振荡重悬磁珠),混匀后4℃孵育10 min。孵育过程中应轻轻敲打管壁1~2次,防止细胞和beads沉降。
注意:如果分选更多细胞,则按比例增加Streptavidin beads用量。例如分选5×107细胞,则应在500 μl细胞悬液中加入10 μl Biotin-Ab Mix和100 μl Streptavidin beads。如果分选少于1×107 个细胞,则将细胞悬液体积补至100 μl,使用2 μl Biotin-Ab Mix和20 μl Streptavidin beads。
7. 孵育完成后,在流式管加入2.5 ml分选buffer,以移液器上下混合吹打5次混匀(避免剧烈振荡或者上下颠倒混匀)。
8. 将含有细胞的分选流式管置于磁力架上(若没有合适的磁力架,可将流式管中液体转移到15 mL离心管中再置于磁力架上),静置5 min。
9. 将细胞悬液轻柔倒入无菌离心管中(倾倒过程中流式管不要脱离磁力架)或用吸管吸入离心管中(勿将液体吸尽,防止吸到磁珠),500 g,离心5 min。细胞悬液中即包含纯化的小鼠CD8+ T细胞,离心后弃上清,收集细胞。
10. 根据实验需要洗涤细胞后,将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中,即可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。

常见问题与对策

常见问题 可能原因 对策
分选细胞纯度不高 长期存储或存储条件不当导致试剂失活 使用新的试剂盒
组织研磨不充分 增加研磨时间
细胞悬液中有组织和细胞团块 使用细胞筛网过滤细胞
分选细胞数量少 组织研磨不充分 增加研磨时间
加入试剂体积不足 参照说明书按细胞数量级调整试剂体积

资料下载

小鼠CD8+ T细胞分选试剂盒使用手册

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