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首页 > 免疫沉淀亲和凝胶系列产品 > Anti-Flag亲和凝胶

Anti-Flag亲和凝胶 

产品号 规格 单价 数量  
B23101 1 mL Kit RMB 1894.18
B23102 5 mL Kit RMB 5994.63
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电话: 400-115-0509邮箱: [email protected]

实验数据

Customer Product Validation(13)






价格对比

产品描述

Bimake Anti-Flag Affinity Gel 由高质量的鼠源 IgG2b 单克隆抗体与sepharose 4B gel 通过供价偶联制备,本产品具有较高的Flag标签融合蛋白加载容量(至少为1.1mg protein /ml gel),杂蛋白非特异结合少,可用于蛋白质免疫共沉淀和少量蛋白质纯化。

产品性质

抗体克隆号 1E6
抗体亚型 鼠源IgG2b
抗体纯化方法 Protein A 纯化制备
抗体结合量 7.5 克抗体/升gel
适用范围 蛋白质免疫共沉淀,蛋白质纯化
推荐使用体积 蛋白质免疫共沉淀: 500μl 细胞裂解液 使用 5μl gel
融合蛋白结合容量 至少为1.1mg protein/ml gel
结合特性 甲硫氨酸修饰的N端Flag融合蛋白:Met-FLAG–Protein
N端Flag 融合蛋白:FLAG–Protein
C端 Flag 融合蛋白:Protein-FLAG
运输条件 4°C 冰袋

产品储存溶剂

Bimake Anti-Flag Affinity Gel 储存溶剂:10 mM Na3PO4, 150 mM NaCl, 50% 甘油, pH 7.4,含有0.02%(w/v)叠氮化钠。

储存条件

未开封的产品可在-20℃稳定保存2年。使用后需保存在储存溶剂(50%甘油,10 mM Na3PO4,150 mM NaCl,0.02%叠氮化钠,pH7.4)中并且禁止在不含甘油的溶剂中冻存。

操作步骤

磁珠预处理
1、轻微重悬Anti-Flag Affinity Gel使均一,迅速转移10 μL混合液(约5 μL纯胶)至新的离心管中。
2、加入500 μL TBS (50 mM Tris HCl, 150 mM NaCl, pH 7.4),轻轻混匀,5,000 rpm离心30s,弃上清,重复上述步骤3-4次。
样本的结合
3、上述的凝胶中加入50-200 μL细胞裂解液,然后室温孵育2 h或4 ℃条件下过夜。
4、5,000 rpm离心30s,将上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测Flag-tag蛋白是否存在残留)。
洗涤
5、向上述沉淀中加入500 μL PBST(NaCl 136.89 mM; KCl 2.67 mM;Na2HPO4 8.1 mM; KH2PO4 1.76 mM;0.5% Tween20),用移液器轻柔地吹打重新分散凝胶,然后上下翻转样品5 min。5000rpm离心30s,弃上清。
6、重复上述步骤两次。如遇到非特异性杂蛋白去除不干净的情况,请延长清洗时间、增加清洗次数或适当增加清洗液中去垢剂的含量。
洗脱
根据下游用途选择不同的洗脱方法,进行免疫共沉淀可直接进行7-8步;进行蛋白纯化可根据后续实验,选择多肽竞争性洗脱(9-10步)或low pH洗脱(11-12步)

变性洗脱(适用于利用Anti-Flag Affinity Gel进行免疫共沉淀实验):
7、对于直接检测目的蛋白的情况,在上述所得沉淀中加入50 μL 1×蛋白上样缓冲液,煮沸5 min,冷却至室温并离心。
8、取上清进行SDS-PAGE检测。

Poly FLAG多肽竞争性洗脱(适用于利用Anti-Flag Affinity Gel进行蛋白纯化实验):
9、将含有200 ug-1 mg/ml Poly Flag多肽(B23111)的TBS缓冲液加入步骤6的产物中,Poly FLag多肽缓冲液体积为凝胶使用量的5倍,4℃摇床孵育洗脱2 hour(为了提高洗脱效率,可延长孵育时间或重复洗脱)
10、将上述步骤得到的产物进行离心(5000rpm,30s),将包含目的蛋白的上清转移到新的EP管中。凝胶如需重复使用,需用0.1M glycine HCl(pH 3.0)进行清洗后再回收。

低pH洗脱(适用于利用Anti-Flag Affinity Gel进行蛋白纯化实验):
11、将0.1M glycine HCl(pH 3.0)洗脱液加入步骤6中的产物中,洗脱液体积为凝胶使用量的5倍,摇床孵育洗脱5min,洗脱时间不得超过20 min。
12、将上述产物进行离心(5000rpm,30s),将洗脱产物立即加入1M Tris(pH 8.0)进行中和,并调节pH直至中性。

Bimake同时提供Poly FlAG多肽冻干粉,可以更温和有效地洗脱目标蛋白产物。

资料下载

Anti-Flag亲和凝胶使用手册

技术支持

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