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首页 > 动物实验 > 鼠尾直接PCR试剂盒(快速基因型鉴定)

鼠尾直接PCR试剂盒(快速基因型鉴定) 

产品号 产品名称 规格 单价 数量  
B40013 Mouse Direct PCR Kit (200) 200 rxns RMB 762.87
B40015 Mouse Direct PCR Kit (500) 500 rxns RMB 1602.25
B45012 2x M-PCR OPTI™ Mix (Dye Plus) 1ml*5 (500 rxns) RMB 1062.99
B45013 2x M-PCR OPTI™ Mix (Dye Plus) 1ml*20 (2000 rxns) RMB 3522.86
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电话: 400-115-0509邮箱: [email protected]
Mouse Direct PCR Kit (For Genotyping)

产品优势

操作简单:无需DNA提取,裂解液直接PCR鉴定;
省时:比传统方法节约13h(以基因组DNA为例)。

实验数据

Customer Product Validation(14)






价格对比

产品描述

本试剂盒专为小鼠快速基因型鉴定(Genotyping)而研制。试剂盒中包含的高效组织消化液(Buffer L, Protease Plus)能够迅速从小鼠尾巴耳朵脚趾等组织中释放足量的基因组DNA,消化时间仅需15分钟,无需抽提与纯化,可直接将消化产物作为模板加入抗干扰型2 x M-PCR Mix中进行PCR扩增,PCR扩增产物可直接点样进行电泳观察。实验操作简便而省时。

应用范围

小鼠基因型鉴定(尾巴、耳朵或脚趾)
小鼠基因组DNA扩增、测序

结果分析:

Mouse Direct PCR Kit对鼠尾、鼠趾、鼠耳都适用,55℃消化15min和30min的效果无显著性差异,对于大片段3Kb也能有效扩增。
注:其中片段500bp和3Kb左右的引物是根据小鼠GAPDH基因设计的;片段1Kb和2Kb的引物是根据小鼠Ppip5k2基因设计的。

产品组成

Complete Kit B40013 (200 rxns) B40015 (500 rxns)
Buffer L (mL) 20 50
Protease Plus (mL) 0.4 1
2 x M-PCR OPTI™ Mix (mL) 2 5
User Guide Yes Yes

储存条件

Buffer L 4℃保存,其余组分-20℃保存。保质期2年。

操作步骤

1. 组织消化

1.1. 按小鼠数量配制组织消化液,试剂比例如下:

  (单样本)
Protease Plus 2 μL
Buffer L 100 μL

组织消化液现用现配,充分混匀后使用。

1.2. 向每个含有样本的EP管中加入100 μL新鲜组织消化液,55℃水浴/金属浴中消化15 min。组织消化时,务必将组织完全浸没于消化液中。消 化完成后,组织外观上仍然完整,但足量的基因组DNA已经释放,不影响后续的PCR实验。

1.3. 将样本置于95℃水浴/金属浴中孵育5 min以灭活消化液中的蛋白酶活性。12000 rpm离心5分钟,取上清作为PCR模板。消化后的上清或连同组织的消化液可于-20℃保存三个月。

2. PCR扩增

2.1. PCR反应体系:

反应体系的配制最好于低温环境下(如冰浴)完成,以保证PCR扩增效率和扩增特异性。

PCR 反应组分 20 μL 反应体系 (μL) 50 μL 反应体系 (μL)
ddH2O 8 21
正向引物 (10 μM) 0.5 1
反向引物 (10 μM) 0.5 1
模板(消化产物) 1 2
2 x M-PCR OPTI™ Mix 10 25
模板体积可以适当调整。

2.2. PCR反应条件:

温度 (℃) 时间 循环数
94 5 min 1
94 20 sec 35
50-65 30 sec
72 X min (2kb/min)
72 5 min 1
12 -- 1

PCR产物的3’端带有碱基A,可直接克隆至T载体,用于DNA测序。

3. 琼脂糖凝胶电泳

试剂2 x M-PCR OPTITM Mix中含有溴酚蓝染料,PCR产物可直接点样进行琼脂糖凝胶电泳。

常见问题与对策

常见问题 可能原因 对策
样本组与阳性对照组均无扩增条带 长期存储或存储条件不当导致试剂失活 使用新的试剂盒
引物质量问题 重新设计合成引物
退火温度过高 建议每2℃为一个梯度降低退火温度,摸索最佳条件
延伸时间过短或循环数过少 适当增长延伸时间或提高循环数至36-40 Cycles
样本组无扩增条带而阳性对照组正常 未充分消化组织样本 将消化时间延长至30 min
加入过多模板抑制PCR 降低模板用量
未完全灭活蛋白酶活性 消化产物在95℃加热5 min
有非特异性扩增条带 PCR引物错配 重新设计PCR引物
PCR体系配制不当(引物浓度或DNA模板浓度过高) 适当降低引物和模板用量
PCR反应条件设置不当(退火温度过低或循环数过高) 适当提高退火温度或降低循环数
配制PCR体系时环境温度过高或体系配制完成到PCR仪反应间隔时间过久 在冰浴环境下配制PCR反应体系,完成后尽快放入PCR仪中开始反应
阴性对照出现目的条带 PCR试剂或操作工具污染 使用新的试剂,重新高压灭菌ddH2O和PCR用品。操作过程中动作尽量轻柔,避免加样溅出污染其他样品
实验结果重复性不好 试剂活性不稳定或DNA模板降解 低温保存所有试剂,重新提取样本基因组DNA
样本DNA交叉污染 建议每个取样器只取一个样本,或取完一个样本后,将取样器刃口浸没在75%酒精或2%次氯酸钠溶液中反复涮洗,用干净的纸巾擦干后,再取下一个样本
PCR产物交叉污染 操作过程中动作尽量轻柔,避免管中PCR产物溅出污染其他样品。电泳上样过程中,小心加入适量PCR产物到相应泳道中,避免上样过多溢出或动作过大而污染相邻泳道样品。注意勤换枪头以避免产物交叉污染

资料下载

鼠尾直接PCR试剂盒

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